Информация, доклады, сообщения

О разработке иммунологических биочипов для выявления и дифференциации антител к патогенным серотипам лептоспир

14.12.2012

Отделом биотехнологии ФГБУ «ВГНКИ» (заведующий - Обухов И. Л., д.б.н., профессор) в рамках проводимой научно-исследовательской работы представлен отчет по теме «Разработка иммунологических биочипов для выявления и дифференциации антител к патогенным серотипам лептоспир». В отчете сообщается, что на сегодняшний день в диагностике лептоспироза наиболее специфичным и надежным серологическим методом считается реакция микроагглютинации (РМА) с живыми культурами лептоспир основных серогрупп. Основными недостатками РМА являются значительные затраты времени и труда на ее постановку, необходимость применения большого количества антигенов лептоспир разных серогрупп, необходимость контроля чистоты и качества используемых живых лептоспирозных антигенов, потенциальная опасность заражения проводящих серологическое исследование специалистов, субъективность оценки результатов.

К сожалению, современные методы иммуноферментного анализа (ИФА),  использующие различные антигены лептоспир, иммобилизованные на твердых носителях, не позволяют дифференцировать серотипы. Целью данной работы  является проверка возможности иммобилизации инактивированных клеток лептоспир на твердых носителях с сохранением ими антигенной активности и специфичности, что позволит создать иммунологических биочипы  для выявления  и дифференциации антител ко всем серогруппам лептоспир. Разработка метода на основе иммунологических биочипов позволит быстро и эффективно выявлять и дифференцировать серогрупповые антитела в одном анализе без использования живых культур лептоспир.
Был выбран способ инактивации лептоспир обработкой 0.25% формалином при 37С в течении 1 часа, позволяющий сохранить групповую специфичность антигенов. Инактивация лептоспир 0.25 % формалином часто применяется в технологии изготовления инактивированных вакцин. Обработанные формалином препараты были протестированы с помощью стандартной РМА.  Было выяснено, что антигены не теряли или теряли не более 50% своей антигенной активности по сравнению с живыми лептоспирами, при этом серогрупповая специфичность сохранялась. Приготовленные таким образом антигены могли храниться не менее трех месяцев при +4оС без изменения антигенных свойств.
Была проверена возможность иммобилизации инактивированных формалином лептоспир на различных носителях: cлайды на нитроцеллюлозной основе, слайды с альдегидными группами, эпоксигруппами и с аминогруппами. В работе использовали стандартные гипериммунизированные сыворотки.  К сожалению,  после нанесения на поверхность различных типов слайдов, лептоспиры некоторых серогрупп (Яваника, Сейро) значительно теряли антигенные свойства.  Наибольшая сохранность антигенных свойств и специфичности  наблюдалась при иммобилизации антигенов на  поверхности с альдегидными группами. Также было проведено тестирование клинического материала - сывороток крови собак, положительных и отрицательных в РМА с антигенами лептоспир.
В дальнейшем  будут проведены дополнительные исследования по оптимизации условий связывания лептоспир на иммуночипе с целью повышения чувствительности и серогрупповой специфичности. Для решения задач на 2013 год требуется выполнение следующих работ: оптимизация условий связывания лептоспир на иммуночипе с целью повышения чувствительности и групповой специфичности, а также оптимизация условий связывания иммобилизованных антигенов с антителами из сыворотки крови животных.

Пресс-служба ФГБУ «ВГНКИ»