Информация, доклады, сообщения

О разработке панели сывороток для валидации бруцеллезных диагностических препаратов

11.12.2012

Отдел бактерийных лекарственных средств для ветеринарного применения ФГБУ «ВГНКИ» (заведующий – Скляров О.Д., д.в.н.) в рамках научно-исследовательской работы по теме «Разработка панели сывороток для валидации бруцеллезных диагностических препаратов» представил отчет за 2012 год. Исследования помимо ФГБУ «ВГНКИ» проводились в Прикаспийском ЗНИВИ, НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи, республиканских, краевых и областных ветеринарных лабораториях РФ. 

В отчете отмечается, что валидация средств диагностики бруцеллеза животных, оценивающая их пригодность и достоверность, и гармонизация требований к их качеству в соответствии с Руководством МЭБ по наземным животным предполагает наличие специфических тест-объектов с разным содержанием антител. Наиболее целесообразным является разработка панели сывороток с диапазоном антител от высокого до низкого. В идеале, образцы сывороток должны представлять животных (крупный и мелкий рогатый скот) с известным эпизоотическим статусом по бруцеллезу, как инфицированных так и неинфицированных.
 
Расфасованные в ампулы и лиофилизированные образцы сывороток могут служить стандартами и гарантировать, что на протяжении длительного срока серологические исследования всегда будут давать точные результаты. В состав разрабатываемой панели будет включена и национальная стандартная сыворотка антибруцелла абортус, активность которой эквивалентна международному эталону, что позволит гармонизировать тест-системы, находящиеся в стадии изучения, производственных или регистрационных испытаний.
 
До настоящего времени в Российской Федерации подобной панели сывороток с разным содержанием специфических антител разработано не было.
 
Ставились следующие задачи. Необходимо изготовить стандартную сыворотку антибруцелла абортус, образцы сыворотки крови крупного рогатого скота антибруцелла абортус с титром в РА 1:200 – 1: 400и в РСК 1:10 – 1:20 с оценкой не ниже 2 крестов, образцы сыворотки крови мелкого рогатого скота антибруцелла мелитензис с титром в РА 1:200 – 1:400 и РСК 1:40 –1:80 с оценкой не ниже 2 крестов, кроличью R-бруцеллезную сыворотку антибруцелла абортус, образцы сыворотки крови крупного или мелкого рогатого скота, инфицированного полевыми культурами бруцелл при наличии больных бруцеллезом животных. Работа выполнялась в соответствии с утвержденным календарным планом с использованием 2 бычков массой 150-200 кг и 3 баранов в возрасте 1 года.
 
В результате из сыворотки крови быка-продуцента, гипериммунизированного культурой штамма Brucellaabortus104 М, изготовлены (стандартизированы и лиофилизированы) три серии стандартной сыворотки anti-Brucellaabortus с активностью 1000 МЕ агглютинирующих антител/мл - в количестве 1200 ампул. По активности сыворотка эквивалентна международной стандартной сыворотке anti-Brucellaabortus. Запланирована комиссионная проверка активности трех серий сыворотки с целью определения и объявления одной из трех серий национальной стандартной сывороткой anti-Brucellaabortus.
 
Апробирована новая схема гипериммунизации баранов, соответственно культурами штаммов B.melitensis Рев-1 и B.abortus КВ 17/100, предполагающая: первое введение культуры – подкожно; второе – в регионарный лимфоузел; третье – внутривенно, с последующим через 30 дней после последнего введения культур тотальным обескровливанием животных.
 
Титр сыворотки крови баранов anti-Brucellamelitensis и anti-Brucellaabortus в РА, соответственно с    S- и R-бруцеллезными антигенами составил 1:400. Всего получено по 1 литру указанных сывороток, которые подготовлены для лиофилизации и будут использованы для изготовления панелей для валидации бруцеллезных диагностикумов.
 
Гипериммунизация по вышеуказанной методике кроликов позволила получить R-бруцеллезную кроличью сыворотку в количестве 450 мл с титром в РА 1:400.
 
Гипериммунизация кроликов по традиционной схеме, предусматривающей 4-5-ти кратное введения культур бруцелл, а также модификации этой схемы путем включения инъекций тималина и циклофосфана или тималина, циклофосфана и масляных адъювантов, не позволила получить сыворотки требуемой активности.
 

Пресс-служба ФГБУ «ВГНКИ»