Информация, доклады, сообщения

О разработке экспрессных методик определения микотоксинов в кормах и пищевом сырье

12.12.2012

Отдел безопасности кормов и пищевых продуктов ФГБУ «ВГНКИ» (заведующий – Комаров А.А., д.б.н., профессор) в рамках проводимой научно-исследовательской работы по теме «Разработка экспрессных методик определения микотоксинов в кормах и пищевом сырье» представил отчет за 2012 год.

В отчете сообщается, что микотоксины, продукты метаболизма микроскопических несовершенных грибов, представляют собой обширную и разнообразную группу экотоксикантов природного происхождения. Многие из них обладают канцерогенными, мутагенными, гепатотоксическими свойствами, а также оказывают иммунодепрессивный эффект. Среди микотоксинов, представляющих опасность для здоровья человека и животных, наиболее распространены афлатоксины, трихотецены, охратоксины, зеараленон. Эти вещества достаточно устойчивы к воздействиям окружающей среды и не разрушаются даже при термической обработке, вследствие чего загрязнение ими пищевых продуктов и кормов несет серьезную опасность здоровью человека и животным.

Создание методов их аналитического контроля продолжает оставаться в центре внимания крупнейших международных организаций (IUPAC, AOAC International и IFJU), специализированных национальных организаций стран ЕС и США, а также Академий и министерств многих стран мира. Основные требования к скрининговым методам определения запрещенных экотоксикантов заключаются в следующем: обеспечение достаточно высокой чувствительности (на уровне мкг/кг) и специфичности, во избежание влияния других аналитов, а также простоте в применении и экономичности.
 
Стратегия контроля содержания микотоксинов в различных объектах включает использование системы скрининговых и подтверждающих методов. В качестве подтверждающего метода контроля содержания микотоксинов используют метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС).
 
Наиболее распространенным скрининговым методом определения микотоксинов является иммуноферменный анализ (ИФА). В ГНУ ВНИИВСГЭ (Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Россельхозакадемии, г. Москва) были разработаны ИФА тест-системы для определения в кормах Т2-токсина, дезоксиниваленола, зеараленона, фумонизина В1, охратоксина А, цитринина и афлатоксина В1, проведена огромная работа по их проверке и внедрению в практику и издан ГОСТ Р 52471-2005 «Корма. Иммуноферментный метод определения микотоксинов». Данные методики обладают рядом существенных преимуществ, таких как высокая производительность, низкая стоимость, малый объем тестируемого образца, простая подготовка проб, по сравнению с ВЭЖХ или ТСХ. На анализ в среднем тратится около двух часов.
 
Новая тенденция при создании скрининговых методов – разработка экспрессных методов, время анализа в которых занимает менее 10 минут. К таким методам относится поляризационный флуоресцентный иммуноанализ (ПФИА), выгодно отличающийся экспрессностью и возможностью его автоматизации.
 
Этот метод впервые был предложен в 1973 году и после ряда изменений, связанных с усовершенствованием аппаратуры и развитием новых областей применения, занял важное место среди методов исследования в биоаналитической химии. Метод ПФИА основан на конкуренции молекул свободного и меченного флуоресцентной меткой антигена за сайты специфического связывания антител и детектировании поляризации флуоресценции реакционной смеси, которая обратно пропорциональна концентрации аналита. К числу его достоинств, помимо вышеперечисленных, можно отнести высокую специфичность и чувствительность, а также простоту проведения анализа, что и обеспечивает широкое распространение метода для первичного скрининга различных низкомолекулярных ксенобиотиков.
 
Результаты анализа реальных образцов зерна, полученные с помощью разработанных методик ПФИА, находятся в хорошем соответствии с данными, полученными при анализе этих образцов другими методами (ИФА и ВЭЖХ). Исходя из этого можно сделать вывод, что полученные методики могут быть использованы для анализа микотоксинов в реальных образцах зерна.
 
В ходе проведенных исследований синтезированы различные иммуногены и трейсеры- конъюгаты исследуемых микотоксинов с флуоресцеином, которые протестированы на предмет связывания со специфичными антителами и выбраны их оптимальные комбинации. Оптимизированы методики подготовки проб зерна к анализу. Разработаны 4 тест-системы для экспрессного определения: зеараленона, ДОНа, охратоксина А и афлатоксина В1 методом ПФИА.
 
Нормативная документация на тест-системы рассмотрена в ФГБУ «ВГНКИ» и утверждена на ТК 454 «Охрана жизни и здоровья животных и ветеринарно-санитарная безопасность продуктов животного происхождения и кормов». 

Пресс-служба ФГБУ «ВГНКИ»