Информация, доклады, сообщения

О совершенствовании способов лечения и профилактики сальмонеллеза свиней

23.01.2013

Отдел бактерийных лекарственных средств для ветеринарного применения ФГБУ «ВГНКИ» (заведующий – Скляров О.Д., д.в.н.) в рамках научно-исследовательской работы представил отчет по теме «О совершенствовании способов лечения и профилактики сальмонеллеза свиней». В задачи исследований на 2012 год входило: изготовить экспериментальную серию вакцины против сальмонеллеза свиней на основе селекционированных штаммов, испытать экспериментальную серию вакцины в свиноводческих хозяйствах, а также изготовить экспериментальную серию бактериофага и изучить его эффективность в лабораторных условиях и в свиноводческих хозяйствах.

В отчете сообщается, что по статистическим данным в хозяйствах промышленного типа заболеваемость и падеж молодняка регистрируется преимущественно от болезней, сопровождающихся симптомокомплексом поражения желудочно-кишечного тракта и органов дыхания, и в частности от сальмонеллеза. Эта инфекция эндемична для хозяйств с промышленной технологией. В хозяйствах с хорошими условиями кормления и содержания болезнь проявляется спорадически, а при неудовлетворительных - массово. Основными предрасполагающими факторами сальмонеллеза является агамма- или гипогаммаглобулинемия, обусловленные неполноценностью молозива от неподготовленных супоросных свиноматок и несвоевременным его скармливанием новорожденным, а также многочисленные причины, снижающие резистентность макроорганизма.

По данным отчета о работе отделения ветеринарной медицины РАСХ в общей инфекционной патологии сельскохозяйственных животных наибольшую заболеваемость (97%) отмечали в свиноводстве, последняя была обусловлена сальмонеллами (45,96%), эшерихиями и серпулинами (44,41%) и другими патогенами. Сальмонеллез проявляется, главным образом, у свиней в возрасте 10-16 недель. Заболеваемость в стаде может достигать 10-50%, а падеж – 5-10%.

Сальмонеллез свиней способны вызывать несколько десятков сероваров сальмонелл. Большинство из них вызывают у животных хроническое носительство. Энзоотии и спорадические случаи сальмонеллеза, с большой смертностью поросят и массовым заболеванием животных связаны с небольшим количеством сероваров: S. choleraesuis, S. typhisuis, S. typhimurium, S. dublin, значи­тельно реже обнаруживаются S. enteritidis, S. gleser, S. voldagsen. Особое место среди них занимает серовар S. typhisuis.

По литературным данным этот возбудитель является причиной массовых заболеваний свиней с легочной формой сальмонеллеза, трудно поддающейся лечению и профилактике антибактериальными препаратами и иммунобиологическими средствами.

S. choleraesuis и S. typhisuis имеют одинаковую антигенную структуру, но могут быть дифференцированы по культуральным и ферментативным свойствам. Генетическая структура этих возбудителей хотя и неодинакова, но очень близка. Тем не менее, они значительно отличаются по фенотипическим характеристикам.

В настоящее время для профилактики сальмонеллеза свиней ветеринария располагает большим арсеналом инактивированных и живых вакцин, изготавливаемых на основе производственных штаммов S.choleraesuis. Известно, что эффективность инактивированных вакцин зависит от количества и качества антигена, природы и свойств адъюванта, от технологии изготовления препарата и способа его применения.

В свиноводческом хозяйстве Воронежской области в течение нескольких лет наблюдается болезнь поросят, характеризующая массовой заболеваемостью и высокой смертностью, достигающей 20% от числа заболевших животных. Клинические признаки и патологоанатомические изменения органов и тканей были характерны для легочной формы сальмонеллеза (pneumoparatyphus), которая встречается довольно часто при ассоциации сальмонелл сероваров choleraesuis и typhisuis. Воронежской областной лабораторией от больных животных были неоднократно выделены культуры сальмонелл, идентифицированные как S. typhisuis.

При исследовании в лаборатории патматериала от больных поросят (кусочки печени, селезенки, почек и желчного пузыря) выделены изоляты сальмонелл, типированные как S. choleraesuis.

Выделенные изоляты ферментировали глюкозу с образованием кислоты и газа, маннит, сорбит, мальтозу, рамнозу, галактозу и ксилозу, не ферментировали лактозу, сахарозу, арабинозу, дульцит, раффинозу и инозит, не образовывали индол и сероводород, утилизировали цитрат в среде Симмонса, декарбоксилировали лизин и орнитин, не обладали бета-галактизидазой, не вызывали гидролиз мочевины, не образовывали ацетоин и индолпируват.

Помимо испытания свойств выделенных культур на отечественных индикаторных средах, аналогичные результаты получены с помощью тест-системы Microbact 12A производства «Oxoid», Великобритания.

Согласно «Методическим рекомендациям по бактериологической диагностике брюшного тифа и паратифов А, В и С», хотя штаммы сероваров S. choleraesuis и S. typhisuis имеют одинаковую антигенную структуру, они могут быть дифференцированы по культуральным и ферментативным признакам. Штаммы S. typhisuis в отличие от S. choleraesuis не ферментируют глюкозу с образованием газа, не ферментируют маннит, сорбит, неспособны утилизировать цитрат в среде Симмонса и декарбоксилировать лизин.

Таким образом, установлено, что изучаемые культуры сальмонелл принадлежат к серологическому варианту S. choleraesuis.

Вирулентность штамма для лабораторных животных была невысокой. ЛД50 для белых мышей массой 12-14 г составила 23,4 тысячи микробных клеток, для морских свинок массой 350 г. - около 3 млрд микробных клеток.

К исследуемому штамму селекционирован высоактивный бактериофаг S. choleraesuis, обладающий широким спектром литического действия. Для репродукции бактериофага подобран оптимальный штамм-хозяин S.choleraesuis № 9, обеспечивающий накопление до 1010 фаговых частиц в мл, в течение 6 часов культивирования.

Инактивацию культуры штамма S. choleraesuis проводили путем добавления 0,3% формалина. В процессе инактивации культуру перемешивали по 5 минут два раза в сутки. Через 10 суток брали пробу бактериальной массы для проверки на полноту инактивации и чистоту посевом на питательные среды МПБ, МПА, МППБ, среду Эндо и микроскопией. Учет результатов посевов осуществляли через 10 суток. Рост на питательных средах отсутствовал.

Дополнительно проверяли полноту инактивации на пяти белых мышах массой 18-20 г путем внутрибрюшинного введения 0,3 мл инактивированной культуры. Процесс инактивации считали завершенным при выживании всех животных в течение 14 суток наблюдения. Все животные оставались живы и клинически здоровы.

Вакцину конструировали с таким расчетом, чтобы после добавления к полученной бакмассе соответствующего количества адъюванта (гидроокиси алюминия 30% к объему, алюмокалиевых квасцов 4% и масляного адъюванта ISA-70) общая концентрация микробных клеток штамма S.choleraesuis в составе препарата была не ниже 4,0 млрд/мл.

Приготовленные серии вакцины проверяли на стерильность путем высева в питательные среды в соответствии с требованиями ГОСТа. Все серии препарата были стерильны.

Безвредность каждой серии вакцины проверяли на 20 белых мышах массой 16-18 г и 10 морских свинках массой 250-280 г при внутрибрюшинном введении соответственно 0,5 и 2,0 мл препарата. Животных наблюдали в течение 10 суток.

Материалы исследований свидетельствуют, что вакцины, содержащие в качестве адъюванта гидроокись алюминия и алюмокалиевые квасцы в указанных дозах, безвредны и не вызывают патологических реакций у белых мышей и морских свинок. Вакцина, содержащая масляный адъювант ISA-70, вызвала у четырех морских свинок и восьми белых мышей образование на месте введения асептических абсцессов, что, по-видимому, связано с незначительной реактогенностью адъюванта.

Иммуногенную активность полученных серий вакцины с различными адъювантами проверяли на белых мышах и морских свинках.

Надо отметить, что 50%-ная иммунизирующая доза для белых мышей и морских свинок, вакцинированных опытными сериями вакцины с использованием в качестве адъюванта гидроокиси алюминия,  ниже, чем для животных, иммунизированных вакцинами, содержащими алюмокалиевые квасцы и масляный адъювант ISA-70.

В дальнейшей работе использовали гидроокись алюминиевую формолвакцину против сальмонеллеза поросят. ФГУП «Армавирская биофабрика» изготовила 2 серии вакцины в количестве 200 л.

В целях формирования колострального иммунитета у новорожденных поросят вакцинировали супоросных свиноматок на 50-60 день супоросности трехкратно с интервалом 8-10 дней подкожно в дозе по 5,0 мл. Вакцинацию поросят начинали с 20-дневного возраста. Вакцину вводили двукратно с интервалом 10 дней, подкожно в дозе по 4,0 мл.

В 2012 году в свиноводческом хозяйстве Воронежской области иммунизировано данной вакциной 200 супоросных свиноматок и 8500 поросят.

Исследования показали, что разработанная вакцина против сальмонеллеза поросят обладает высокой антигенной активностью - средний титр антител в сыворотке крови поросят достигал максимума через 2 недели после второй вакцинации и составил в РА 1:438±40,8  и формирует тем самым высокий пассивный (колостральный) и активный иммунитет. Сохранность новорожденных животных составила 94,5%; поросят 96,0%.

Экспериментальным препаратом бактериофага обработано 80 поросят с признаками заболевания сальмонеллезом. Бактериофаг вводили поросятам перорально, в дозе 5 мл, трехкратно. Первый раз при отъеме поросят в возрасте 30-34 дня, затем через 3 дня после первого введения, и третий раз - через 5 дней после второго применения. Введение бактериофага предохранило от гибели всех обработанных животных, в контрольной группе состоящей из 90 поросят пало 15.

Таким образом, в результате данной работы были изготовлены опытные серии бактериофага и вакцины против сальмонеллеза свиней на основе селекционированных штаммов S. choleraesuis и была испытана их эффективность в свиноводческом хозяйстве Воронежской области с положительным эффектом.